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cck8实验步骤及注意事项一:细胞增殖分析

cck8实验步骤及注意事项一:细胞增殖分析

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】实...

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Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】

实验一:细胞增殖分析

1)制备细胞悬液,计数。
2)在96孔板中接种细胞悬液,每孔约100μl,同样的样本可做3个重复。
3)将培养板放入培养箱中预培养一段时间(37℃, 5%CO2),细胞贴壁需要大约2-4h,如果是悬浮细胞,该步骤可以省去。
4)每孔各加入10μl CCK-8溶液,由于加入的CCK-8量比较少,可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差,建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀,或者直接配置含10%CCK-8的培养基,以换液的形式加入。另外注意,加样的过程中尽量不要产生气泡。
5)将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同,形成的formazan的量也不一样,所以如果显色不够的话,可以延长培养时间,特别是血液细胞形成的formazan很少,需要较长的显色时间(5-6h)。
6)酶标仪测定450nm处的吸光值(OD)。
7)若暂时不测定OD值,可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,室温下避光保存,这样可以保证OD值在24h内不发生变化。


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